绞股蓝总苷对老龄大鼠的抗氧化作用观察
作者：章荣华 张仲苗 耿宝琴 雍定国
单位：章荣华(杭州 310009 浙江省卫生 防疫站毒理科)；张仲苗(杭州 310009 浙江大学附属第二医院药剂科)；耿宝琴 雍定国(杭州 310006 浙江大学 医学院药理教研室)
关键词：绞股蓝总苷；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；维生素C； 大鼠
中国现代应用药学000422 摘要 目的：观察口服绞股蓝总苷对老龄大鼠的抗氧化作用。方法：测定给药后大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和全血谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)等抗氧化酶含量及肾上腺内维生素C(VitC)含量。结果：绞股蓝 总苷40和20mg/kg连续用药20d能升高大鼠红细胞SOD和全血GSH-Px酶活力，且能降低大鼠肾 上腺皮质中VitC含量。结论：绞股蓝总苷能增强老龄大鼠机体抗氧化能 力及提高肾上腺皮质的功能。
, 百拇医药
Antioxidation effect of gypenosides on aged rat
Zhang Ronghua(Zhang RH)，Zhang Zhongmiao(Zhang ZM)，Geng Baoqin(Geng BQ)，et al
(The Health and Epidemic Prevention Station of Zhejiang Prov ince，Hangzhou 310009)
ABSTRACT OBJECTIVE：To ob serve the antioxidation effect of gypenosides on aged rat that had been administ rated gypenosides for a period.METHODS:The activity of SOD of erythr ocyte，GSH-Px of whole blood and the content of Vitamin C in adrenal glands of r ats are assayed.RESULTS:The activity of SOD of erythrocyte and GSH- Px of whole blood were increased while the content of Vitamin C in adrenal gland s was decreased for those rats that took gypenosides orally 40，20mg/kg gypenosid es for 20 days continually.CONCLUSION:Gypenosides improved the antio xidation effect of body and uplift the function of adrenal gland cortex of rat.
, 百拇医药
KEY WORDS gypenosides，SOD，GSH-Px，Vitamin C，Rat
绞股蓝(Gynostemma pentaphylluma Makino)为葫芦科植物，茎叶中含绞股蓝皂甙，可入药 。本文研究了绞股蓝总苷对老龄大鼠红细胞SOD、全血GSH-Px酶活性及肾上腺VitC含量的影 响，现将结果报告如下。
1 材 料
1.1 动物
健康老龄(18个月)SD大鼠52只，♀♂各半，体重分别为(330±10)g和( 340±10)g[浙江省实验动物中心，合格证：浙实验动物设施条件准字(94)201号]。
1.2 药品及试剂
绞股蓝总苷及人参皂甙由杭州药物研究所提供，用蒸 馏水配制溶液。叠氮化钠、邻苯三酚、三氯醋酸、2，4-二硝基苯肼、活性炭、硫脲及无水 乙醇，均系国产，为分析纯；还原型谷胱甘肽(GSH)及二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)，均为美 国 Sigma公司产品；三羟甲基氨基甲烷(Tris)为Gibco BRL产品。
, http://www.100md.com
1.3 主要仪器
721分光光度计(上海第三分析仪器厂)；751G分光光度计 (上海分析仪器厂)；80-2型离心机(日本JEOL公司)；电子天平(上海天平仪器厂)。
2 方法与结果
2.1 肾上腺维生素C(VitC)含量测定[1]
大鼠52只，按体重♀♂随机分为5组，即空白对照组(蒸馏水灌胃，11只)，人参皂甙组(40mg /kg，10只)，绞股蓝总苷10mg/kg(10只)、20mg/kg(10只)及40mg/kg(11只)三组。每日 灌胃一次，连续20d。于末次给药后1h颈静脉取血，处死动物，剖取双侧肾上腺，称重后放 入5%三氯醋酸(TCA)1.5ml中制成匀浆。洗涤两次后离心，取上清液加酸洗活性炭，猛力振荡 后过滤，滤液0.5ml中依次加入5%TCA 1ml，10%硫脲1滴，及2，4-二硝基苯肼0.5ml。于37℃ 水浴保温3h，在冰水中充分冷却后，用滴定管缓慢加入85%硫酸3.5ml。空白对照管(5%T CA)用同法处理。但2，4-二硝基苯肼液于最后加入。各管于分光光度计540nm测定光密度(OD )。从VitC标准曲线中查出各管VitC含量，再计算100mg肾上腺组织中VitC的μg数。
, 百拇医药
结果：老龄大鼠连续20d服用绞股蓝总苷40mg/kg及20mg/kg后可使肾上腺组织内VitC含量明 显低于正常，人参皂甙组的结果亦类似(见表1)。可见绞股蓝总苷长期服用可以提高肾上腺 皮质功能。
表1 绞股蓝总苷对老龄大鼠肾上腺中VitC 含量的影响/x±s 组 别
剂量
/mg.kg-1
n
肾上腺中VitC含量
/mg.100mg-1组织
空白对照组
, 百拇医药 -
11
2.68±0.32
人参皂甙组
40
10
2.23±0.28*1
绞股蓝总苷组
40
11
2.34±0.18*1
20
, http://www.100md.com 10
2.36±0.33*2
10
10
2.48±0.48
注：与空白对照组比较，*1 P<0.01，*2P<0.052.2 红细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活力测定 [1]
精确移取大鼠全血50μl，注入盛有5ml生理盐水的试管中，用吸管混匀后经3000r /min离心4min，弃去上清液，加入0.2ml冰冷的双蒸水，使其完全溶血，然后加入预冷(约4 ℃)的乙醇-氯仿混合液(V/V 1:1)0.2 ml，在漩涡振荡器上充分混匀，再经3000r/min离心5 min，上层即为SOD粗提液。然后按邻苯三酚自氧化法测定SOD活力。结果证明绞股蓝总苷40 、20mg/kg两剂量组均能明显升高老龄大鼠红细胞SOD活力，作用与人参皂甙组相当(见表2) 。
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表2 绞股蓝总苷对老龄大鼠红细胞SOD活力的影响/ x±s 组 别
剂量
/ mg.kg-1
n
红细胞SOD活力
/U.g-1.Hb
空白对照组
-
11
2051.3±517.2
人参皂甙组
, http://www.100md.com
40
10
2623.5±681.4*
绞股蓝总苷组
40
11
2654.6±433.3*
20
10
2756.6±386.7*
10
10
, http://www.100md.com
2386.7±471.1
注：与空白对照组比较，*P<0.05
2.3 全血谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)活力 测定[1]
精确移取大鼠全血10μl，用双蒸水稀释至1.00ml，充分振摇，使之全部 溶血成为1∶100溶血液。然后按DTNB直接法进行测定。结果可见绞股蓝总苷40、10mg/kg组 均能提高老龄大鼠全血GSH-Px活力(见表3)。
表3 绞股蓝总苷对老龄大鼠全血GSH-Px活力的影响/x±s 组 别
剂量
/mg.kg-1
, 百拇医药
n
全血GSH-Px活力
/U
空白对照组
-
11
42.7±6.7
人参皂甙组
40
10
45.8±11.6
绞股蓝总苷组
40
, http://www.100md.com
11
55.2±8.7*
20
10
41.8±12.8
10
10
54.3±9.0*
注：与空白对照组比较，*P<0.05
3 讨 论
《中药大辞典》记载，绞股蓝“味苦、性寒 、无毒”，具“消炎解毒、止咳祛痰”之功效，民间常用于治疗咳嗽、痰喘、慢性支气管炎 及传染性肝炎等疾病。现代医学研究发现，绞股蓝有抗菌、抗癌、抗应激、心肌缺血及降血 糖、血脂等诸多药理作用[2～4]。李锐[5]曾通过测定绞股蓝皂甙给药组 小鼠肝脑组织LPO、SOD含量及皮肤羟脯氨酸含量后认为，绞股蓝皂甙具有抗氧化延缓衰老的 作用，本实验用一定剂量的绞股蓝总苷给予老龄大鼠并从红细胞SOD活力、全血GSH-Px活力 和肾上腺皮质VitC含量等指标中得出了一致结论。
, 百拇医药
衰老的自由基学说认为，体内代谢产生 的自由基可攻击细胞成分并造成损伤，最终导致细胞功能和结构的改变。本实验结果表明， 绞股蓝总苷可增强SOD和GSH-Px的活性，直接淬灭自由基，清除自由基对机体的损害，从而 恢复老年机体自由基代谢的平衡。另外，机体在衰老过程中可出现肾上腺功能的减退，这主 要由下丘脑-垂体-肾上腺轴功能减退所引起。而肾上腺内VitC含量下降与肾上腺皮质功能 呈正相关，本实验中绞股蓝总苷组老龄大鼠肾上腺VitC含量明显低于对照组，提示绞股蓝总 苷对肾上腺皮质功能具有上调作用。至于这一调节作用的机理，还有待进一步研究。
参考文献
[1]徐叔云主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版 社，1991.
[2]钱浩，傅琛，王丽娟，等.绞股蓝在 原发性肺癌放疗和化疗中对细胞免疫功能的保护作用.上海医科大学学报，1995，22(5)∶363 .
[3]韩红，李麟仙，王琼仙，等.珠子参总多甙、三七总多甙 及绞股蓝总多甙对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.中国病理生理杂志，1994，10(2)∶128.
[4]杨五宁，赵方勤，陈卫强，等.绞股蓝总多甙对高脂血症 的疗效.南京部队医药，1996，(5)∶49.
[5]李锐，黄伟红，苏子仁，等.绞股蓝总甙、青春宝、有机 锗等药物抗氧化延缓衰老实验研究.新中医，1990，(1)∶36.
收稿日期：1999-01-04, 百拇医药
单位：章荣华(杭州 310009 浙江省卫生 防疫站毒理科)；张仲苗(杭州 310009 浙江大学附属第二医院药剂科)；耿宝琴 雍定国(杭州 310006 浙江大学 医学院药理教研室)
关键词：绞股蓝总苷；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；维生素C； 大鼠
中国现代应用药学000422 摘要 目的：观察口服绞股蓝总苷对老龄大鼠的抗氧化作用。方法：测定给药后大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和全血谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)等抗氧化酶含量及肾上腺内维生素C(VitC)含量。结果：绞股蓝 总苷40和20mg/kg连续用药20d能升高大鼠红细胞SOD和全血GSH-Px酶活力，且能降低大鼠肾 上腺皮质中VitC含量。结论：绞股蓝总苷能增强老龄大鼠机体抗氧化能 力及提高肾上腺皮质的功能。
, 百拇医药
Antioxidation effect of gypenosides on aged rat
Zhang Ronghua(Zhang RH)，Zhang Zhongmiao(Zhang ZM)，Geng Baoqin(Geng BQ)，et al
(The Health and Epidemic Prevention Station of Zhejiang Prov ince，Hangzhou 310009)
ABSTRACT OBJECTIVE：To ob serve the antioxidation effect of gypenosides on aged rat that had been administ rated gypenosides for a period.METHODS:The activity of SOD of erythr ocyte，GSH-Px of whole blood and the content of Vitamin C in adrenal glands of r ats are assayed.RESULTS:The activity of SOD of erythrocyte and GSH- Px of whole blood were increased while the content of Vitamin C in adrenal gland s was decreased for those rats that took gypenosides orally 40，20mg/kg gypenosid es for 20 days continually.CONCLUSION:Gypenosides improved the antio xidation effect of body and uplift the function of adrenal gland cortex of rat.
, 百拇医药
KEY WORDS gypenosides，SOD，GSH-Px，Vitamin C，Rat
绞股蓝(Gynostemma pentaphylluma Makino)为葫芦科植物，茎叶中含绞股蓝皂甙，可入药 。本文研究了绞股蓝总苷对老龄大鼠红细胞SOD、全血GSH-Px酶活性及肾上腺VitC含量的影 响，现将结果报告如下。
1 材 料
1.1 动物
健康老龄(18个月)SD大鼠52只，♀♂各半，体重分别为(330±10)g和( 340±10)g[浙江省实验动物中心，合格证：浙实验动物设施条件准字(94)201号]。
1.2 药品及试剂
绞股蓝总苷及人参皂甙由杭州药物研究所提供，用蒸 馏水配制溶液。叠氮化钠、邻苯三酚、三氯醋酸、2，4-二硝基苯肼、活性炭、硫脲及无水 乙醇，均系国产，为分析纯；还原型谷胱甘肽(GSH)及二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)，均为美 国 Sigma公司产品；三羟甲基氨基甲烷(Tris)为Gibco BRL产品。
, http://www.100md.com
1.3 主要仪器
721分光光度计(上海第三分析仪器厂)；751G分光光度计 (上海分析仪器厂)；80-2型离心机(日本JEOL公司)；电子天平(上海天平仪器厂)。
2 方法与结果
2.1 肾上腺维生素C(VitC)含量测定[1]
大鼠52只，按体重♀♂随机分为5组，即空白对照组(蒸馏水灌胃，11只)，人参皂甙组(40mg /kg，10只)，绞股蓝总苷10mg/kg(10只)、20mg/kg(10只)及40mg/kg(11只)三组。每日 灌胃一次，连续20d。于末次给药后1h颈静脉取血，处死动物，剖取双侧肾上腺，称重后放 入5%三氯醋酸(TCA)1.5ml中制成匀浆。洗涤两次后离心，取上清液加酸洗活性炭，猛力振荡 后过滤，滤液0.5ml中依次加入5%TCA 1ml，10%硫脲1滴，及2，4-二硝基苯肼0.5ml。于37℃ 水浴保温3h，在冰水中充分冷却后，用滴定管缓慢加入85%硫酸3.5ml。空白对照管(5%T CA)用同法处理。但2，4-二硝基苯肼液于最后加入。各管于分光光度计540nm测定光密度(OD )。从VitC标准曲线中查出各管VitC含量，再计算100mg肾上腺组织中VitC的μg数。
, 百拇医药
结果：老龄大鼠连续20d服用绞股蓝总苷40mg/kg及20mg/kg后可使肾上腺组织内VitC含量明 显低于正常，人参皂甙组的结果亦类似(见表1)。可见绞股蓝总苷长期服用可以提高肾上腺 皮质功能。
表1 绞股蓝总苷对老龄大鼠肾上腺中VitC 含量的影响/x±s 组 别
剂量
/mg.kg-1
n
肾上腺中VitC含量
/mg.100mg-1组织
空白对照组
, 百拇医药 -
11
2.68±0.32
人参皂甙组
40
10
2.23±0.28*1
绞股蓝总苷组
40
11
2.34±0.18*1
20
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2.36±0.33*2
10
10
2.48±0.48
注：与空白对照组比较，*1 P<0.01，*2P<0.052.2 红细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活力测定 [1]
精确移取大鼠全血50μl，注入盛有5ml生理盐水的试管中，用吸管混匀后经3000r /min离心4min，弃去上清液，加入0.2ml冰冷的双蒸水，使其完全溶血，然后加入预冷(约4 ℃)的乙醇-氯仿混合液(V/V 1:1)0.2 ml，在漩涡振荡器上充分混匀，再经3000r/min离心5 min，上层即为SOD粗提液。然后按邻苯三酚自氧化法测定SOD活力。结果证明绞股蓝总苷40 、20mg/kg两剂量组均能明显升高老龄大鼠红细胞SOD活力，作用与人参皂甙组相当(见表2) 。
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表2 绞股蓝总苷对老龄大鼠红细胞SOD活力的影响/ x±s 组 别
剂量
/ mg.kg-1
n
红细胞SOD活力
/U.g-1.Hb
空白对照组
-
11
2051.3±517.2
人参皂甙组
, http://www.100md.com
40
10
2623.5±681.4*
绞股蓝总苷组
40
11
2654.6±433.3*
20
10
2756.6±386.7*
10
10
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2386.7±471.1
注：与空白对照组比较，*P<0.05
2.3 全血谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)活力 测定[1]
精确移取大鼠全血10μl，用双蒸水稀释至1.00ml，充分振摇，使之全部 溶血成为1∶100溶血液。然后按DTNB直接法进行测定。结果可见绞股蓝总苷40、10mg/kg组 均能提高老龄大鼠全血GSH-Px活力(见表3)。
表3 绞股蓝总苷对老龄大鼠全血GSH-Px活力的影响/x±s 组 别
剂量
/mg.kg-1
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n
全血GSH-Px活力
/U
空白对照组
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11
42.7±6.7
人参皂甙组
40
10
45.8±11.6
绞股蓝总苷组
40
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11
55.2±8.7*
20
10
41.8±12.8
10
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54.3±9.0*
注：与空白对照组比较，*P<0.05
3 讨 论
《中药大辞典》记载，绞股蓝“味苦、性寒 、无毒”，具“消炎解毒、止咳祛痰”之功效，民间常用于治疗咳嗽、痰喘、慢性支气管炎 及传染性肝炎等疾病。现代医学研究发现，绞股蓝有抗菌、抗癌、抗应激、心肌缺血及降血 糖、血脂等诸多药理作用[2～4]。李锐[5]曾通过测定绞股蓝皂甙给药组 小鼠肝脑组织LPO、SOD含量及皮肤羟脯氨酸含量后认为，绞股蓝皂甙具有抗氧化延缓衰老的 作用，本实验用一定剂量的绞股蓝总苷给予老龄大鼠并从红细胞SOD活力、全血GSH-Px活力 和肾上腺皮质VitC含量等指标中得出了一致结论。
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衰老的自由基学说认为，体内代谢产生 的自由基可攻击细胞成分并造成损伤，最终导致细胞功能和结构的改变。本实验结果表明， 绞股蓝总苷可增强SOD和GSH-Px的活性，直接淬灭自由基，清除自由基对机体的损害，从而 恢复老年机体自由基代谢的平衡。另外，机体在衰老过程中可出现肾上腺功能的减退，这主 要由下丘脑-垂体-肾上腺轴功能减退所引起。而肾上腺内VitC含量下降与肾上腺皮质功能 呈正相关，本实验中绞股蓝总苷组老龄大鼠肾上腺VitC含量明显低于对照组，提示绞股蓝总 苷对肾上腺皮质功能具有上调作用。至于这一调节作用的机理，还有待进一步研究。
参考文献
[1]徐叔云主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版 社，1991.
[2]钱浩，傅琛，王丽娟，等.绞股蓝在 原发性肺癌放疗和化疗中对细胞免疫功能的保护作用.上海医科大学学报，1995，22(5)∶363 .
[3]韩红，李麟仙，王琼仙，等.珠子参总多甙、三七总多甙 及绞股蓝总多甙对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.中国病理生理杂志，1994，10(2)∶128.
[4]杨五宁，赵方勤，陈卫强，等.绞股蓝总多甙对高脂血症 的疗效.南京部队医药，1996，(5)∶49.
[5]李锐，黄伟红，苏子仁，等.绞股蓝总甙、青春宝、有机 锗等药物抗氧化延缓衰老实验研究.新中医，1990，(1)∶36.
收稿日期：1999-01-04, 百拇医药